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      市面上常見的玻璃底培養(yǎng)皿，通常是在塑料培養(yǎng)皿底部打個洞，再將厚度為170-220μm的蓋玻片或細(xì)胞爬片用無影膠水或硅膠粘于培養(yǎng)皿設(shè)備底部。并不是整個培養(yǎng)皿的底部都是玻璃材質(zhì)的。適用于觀測的區(qū)域僅僅在打孔的區(qū)域。但是由于玻璃的疏水性，往往在培養(yǎng)細(xì)胞的時候，細(xì)胞不能在玻璃上很好地貼壁，生長狀態(tài)并不好，甚至在做共聚焦掃描成像的時候發(fā)生細(xì)胞脫片的現(xiàn)象。

      想要細(xì)胞好好貼壁，所使用的玻璃底培養(yǎng)皿進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)之前，要確認(rèn)已經(jīng)包被了特定的蛋白試劑。

      培養(yǎng)不同的細(xì)胞，需要的包被試劑也不同。同時，因?yàn)橛糜诎坏牡鞍资巧锂a(chǎn)物，所以不同公司的包被蛋白的產(chǎn)品純度和用量都是不同的，本技術(shù)帖只是提供參考，具體的包被試劑用量還是要參考所用品牌的說明書。并且最好以自己所用的試劑先做一個梯度實(shí)驗(yàn)，找出最適合的包被濃度。

      PLL包被適用于絕大多數(shù)細(xì)胞，尤其適用于中樞系統(tǒng)神經(jīng)元的培養(yǎng)。在使用時需要使單位面積上的蛋白含量（μg/cm2）達(dá)到理想的量。本例中PLL推薦包被的用量為 2μg/cm2。需要根據(jù)包被面積，包被體積，來計(jì)算所需要蛋白質(zhì)的量。

      比如：35mm玻璃底培養(yǎng)皿，細(xì)胞生長面積是3.5cm2，包被面積是4.1cm2，包被液體積是400μl，那根據(jù)推薦用量2μg/cm2。那么單孔中需要8.2μg的PLL，如果只加入400μl的PLL溶液，那PLL的溶液濃度為20.5μg/ml（約為 20μg/ml）。所以，需要用超純水將原液進(jìn)行稀釋。

      具體步驟：

      1.使用超純水按照1:5稀釋PLL原液。

      2.在每個35mm玻璃底培養(yǎng)皿中加入400μl的PLL稀釋液。

      3.室溫孵育1-2小時，吸出PLL稀釋液。

      4.使用2ml PBS溶液或無血清培養(yǎng)基小心的清洗3次，吸盡清洗液。

      5.直接加入細(xì)胞懸液進(jìn)行培養(yǎng)。

      方法評價：由于各種包被蛋白的性質(zhì)不同，不同的包被蛋白使用方法也不一樣。經(jīng)常由于需要對玻璃底培養(yǎng)皿包被，而產(chǎn)生了新的污染。而且污染往往是開始養(yǎng)細(xì)胞了以后才會發(fā)現(xiàn)，這樣不僅耽誤了時間，而且也浪費(fèi)了試劑盒耗材。畢竟包被蛋白試劑和質(zhì)量有保證的玻璃底培養(yǎng)皿價格也是不菲的（質(zhì)量不過關(guān)的玻璃底培養(yǎng)皿有可能會因?yàn)槟z水沒有粘勻而漏液或者使用的膠水對細(xì)胞有毒性）。